論文：大阪大學3D打印有血管網絡的心臟組織

2020年4月20日，南極熊注意到，日本大阪大學的研究人員最近發(fā)表了一篇論文‘Vascularized cardiac tissue construction with orientation by layer-by-layer method and 3D printer.’，介紹了他們在血管化心臟構造方面進行生物3D打印實驗的發(fā)現。論文的作者是Yoshinari Tsukamoto，Takami Akagi和Mitsuru Akashi，發(fā)表在《Scientific Reports》雜志上。

隨著組織工程在全球實驗室中的不斷發(fā)展，離3D打印人體器官的目標越來越近。 盡管對于許多科學家來說，這種進展似乎遙不可及，但新研究中3D組織的制造仍在繼續(xù)快速發(fā)展。 在本項研究中，作者進一步完善了心臟組織工程學。

（a）使用纖連蛋白（FN）、明膠（G）涂層技術和細胞蓄積技術逐層（LbL）制造3D組織過程的示意圖。 （b）使用LbL包被的細胞和細胞蓄積技術制造具有毛細血管網絡的3D心臟組織的示意圖。

作者對心臟具有特定結構，細胞方向和血管網絡的心臟組織進行生物打印，并使用了逐層制造（LbL），細胞蓄積和3D打印技術。 通過3D打印創(chuàng)建了羥丁基殼聚糖（HBC）凝膠框架，以“線性地”控制細胞的方向。

使用3D打印技術制造方向受控的3D心臟組織的示意圖。 （a）使用自動點膠3D打印機進行羥丁基殼聚糖（HBC ）3D打印。 （b）使用LbL涂層的細胞和細胞蓄積技術制造多層3D組織。 （c）定向控制3D組織的培養(yǎng)。 （d）使用組織學技術和圖像處理評估形狀和收縮特性。

作者表示：“ HBC具有隨溫度變化而發(fā)生溶膠-凝膠轉變的能力�！�

HBC凝膠的使用特別有趣，因為研究人員使用了自動點膠打印機，將墨水冷卻至4°C。 作者進行的評估表明，墨水的線寬約為1mm，潛在的層壓多達八層。

“第九層不能層壓，因為HBC凝膠壁熔化了。 研究人員解釋說，其原因是第九層距離基板較遠，并且由于無法接受溫度控制而熔化。 不過，根據我們之前的研究，3D組織的厚度限制為100μm。 因此，HBC凝膠的3D建模能力足以使用LbL技術和細胞蓄積技術制造3D組織。”

觀察和分析由自動點膠3D打印機打印的5％HBC層壓壁。 （a）從水平方向觀察的層壓HBC凝膠壁的高度。 （b）從垂直方向觀察的層壓HBC凝膠壁的線寬。

通過共聚焦激光掃描顯微鏡（CLSM）獲得的熒光標記的鬼筆環(huán)肽和抗心肌肌鈣蛋白T（cTnT）抗體對形狀受控的3D心臟組織圖像進行染色。 （a – d）使用2×15 mm HBC凝膠框架進行形狀控制的3D心臟組織。 （e-h）不受控制的3D心臟組織。 （a，e）F-肌動蛋白，cTnT和DAPI的合并圖像。 （b，f）F-肌動蛋白和cTnT的合并圖像。 （c，g）cTnT圖像。 （d，h）F-肌動蛋白圖像。 （i，j）通過圖像分析在CLSM圖像下方顯示了形狀受控的3D心臟組織中F-肌動蛋白纖維的局部排列角圖。

接下來，研究人員為他們的3D打印心臟組織創(chuàng)建了一個血管網絡，添加了在1.5×15 mm矩形HBC凝膠框架（5％）中與hiMVC、hMVEC共培養(yǎng)的NHPSC-CMs和NHCF涂層的FN-G納米膜。 利用1.5 mm短邊矩形HBC凝膠框架，研究人員能夠控制3D心臟組織。

形狀控制的3D心臟組織，具有從LSCM獲得的血管網絡圖像染色的抗心肌肌鈣蛋白T（cTnT）抗體和抗CD31抗體。 （a-c）使用1.5×15 mm HBC凝膠框架進行形狀控制的3D心臟組織。 （d，e，f）不受控制的3D心臟組織。 （a，d）cTnT（綠色）和CD31（紅色）的合并圖像。 （b，e）cTnT圖像。 （c，f）CD31圖像。 （g，h）通過圖像分析在CLSM圖像下方顯示了形狀受控制的3D心臟組織中血管網絡（CD31）的局部對準角圖。 （g）取向控制的組織圖。 （h）不受控制的組織圖。

從CD31染色圖像的結果來看，兩個組織都形成了血管網絡。作者總結說，就取向控制的組織而言，根據圖像分析，血管網絡的取向結構類似于心肌細胞。 “另一方面，在不受控制的組織中，血管網絡不具有定向結構�！�

“這種3D心臟組織具有用于移植醫(yī)療和藥物評估的潛力，因為它具有天然的心臟器官樣結構和血管網絡，可用于制造更厚和更大的3D組織。因此，我們相信具有方向和血管網絡的3D心臟組織將是再生醫(yī)學和制藥應用的有用工具�！�

編譯自：3dprint